操作步骤:
1、按国家标准、SN标准、FDA标准或其它方法制备样品液;
2、取 25 克样品液加入 225ml mEC肉汤或mTSB肉汤中,36℃ 增菌培养 18-24 小时;
3、用 3mm 接种环取 1 环增菌液,划线接种到O157菌显色培养基上,做 2 个平板;
4、36℃ 培养 18-24h,O157:H7菌显亮红色、淡红色或红色,菌落周围没有蓝色晕圈;大肠杆菌和大肠菌群显暗蓝色、蓝色或紫色,菌落周围有蓝色晕圈;其它细菌显蓝色、黄色或无色;
5、对典型菌落可做O157:H7菌血清学试验和全套生化试验。
注:必须在 36℃ 培养 24 小时内判读结果,以免菌落颜色发生变化。
质量控制
1、外观
此干燥培养基的粉末均匀,具有良好的流动性,呈灰白色。制备好的平板呈蓝色固体培养基。
2、微生物试验
在 36℃ 培养 18-24h 小时:
质控菌株 | ATCC | 生长情况 | 菌落颜色 |
大肠杆菌O157 | 35150 | +++ | 亮红色 |
金黄色葡萄球菌 | 25923 | -/+ | 黄色或无色 |
大肠杆菌 | 25922 | +/- | 暗蓝色,菌落周围有蓝色晕圈 |
沙门氏菌 | 14028 | +++ | 蓝色 |
奇异变形杆菌 | 12453 | +/- | 无色 |
肺炎克雷伯氏菌 | 10031 | +/- | 蓝色,菌落周围有蓝色晕圈 |
弗氏柠檬酸盐杆菌 | 43864 | +/- | 蓝色菌落有紫色中心,菌落周围有蓝色晕圈 |
坂崎杆菌 |
29004 | ++ | 紫色至蓝色 |
方法的局限性
本培养基上的典型大肠杆菌O157:H7必须做血清学试验或生化试验。
典型特征
典型大肠杆菌O157:H7菌显亮红色、淡红色或红色,菌落周围没有蓝色晕圈;大肠杆菌和大肠菌群显蓝色或紫色,菌落周围有蓝色晕圈;其它细菌显蓝色、黄色或无色;
制备好的平板可保存2-5天,应避免光线直接照射。干燥培养基应放置于阴暗干燥处,保存温度 2-8℃,注意避光保存。
失效
干燥培养基超过保质期、结块和颜色变化都不能使用。
注意
此培养基仅供实验室使用。
参考文献
1、Rappaport, F., and E. Henig. 1952. Media for the isolation and differentiation of pathogenic Escherichia coli (serotypes 0111 and 055). J. Clin. Pathol. 5:361-362.
2、 U.S. Food and Drug Administration. 1995. Bacteriological analytical manual, 8 th ed., AOAC International, Gaithersburg, MD.
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