胰蛋白胨胆盐X-葡糖苷酸(TBX)琼脂(TBX培养基)是青岛海博生物公司改良的培养基,用于食品、水、牛奶、冰激凌和肉制品中大肠杆菌的快速检测。大肠杆菌显蓝绿色,大肠菌群显无色,其它菌显黄色或无色,革兰氏阳性菌被抑制。
此配方可以进行改良或增加营养成份以获得最佳的结果。
用法:
称取本品36. 6g加入1000ml蒸馏水,加热溶解并不停搅拌,煮沸不要超过1分钟。分装三角瓶,121℃ 高压灭菌15分钟。取1ml制备好的样品液加入直径为9cm无菌平皿中心,倾入冷却至45- 50°C培养基约15ml,混匀,凝固后, 36士1℃倒置18~24h。或冷却至45-50°C时,倾入无菌平皿,琼脂完全凝固后, 在超净工作台中开盖吹15- 30分钟,去掉培养基表面水汽,加入适当稀释度的样品液1ml, 涂布于培养基上,36士1°C培养18~24h。
检验原理:
特殊营养物质提供微生物生长所需的碳氮源和微量元素,维持均衡的渗透压,并提供针对革兰氏阳性细菌的选择性,特别是杆菌和粪链球菌;显色剂是由发色团和微生物部分可代谢物质组成,在特异性酶靶定作用下,游离出产色因子用于合成细胞使菌落显示颜色。在TBX培养基上,大肠杆菌菌落显蓝绿色,其它菌显黄色或无色。
操作步骤:
1、按国家标准、SN标准、FDA标准或其它方法制备样品液;
2、取样品液1ml加入冷却至45- -50°C 显色培养基中混匀或涂布于平板上;
3、36+1°C 培养18~24h,选用有30~~200个菌落的平板,计数平板上出现的典型大肠杆菌菌落。大肠杆菌典型菌落为蓝绿色,其它细菌为无色或黄色菌落。总大肠杆菌=蓝绿色菌落;
4、对可疑大肠杆菌菌落可划线接种到营养琼脂平板上, 36+1°C 培养12-16小时,挑取单菌落做大肠杆菌全套生化试验(本公司有生化鉴定管套装4种x4套)。
质量控制:
1、外观
此干燥培养基的粉末均匀,具有良好的流动性,呈乳白色。制备好的平板呈无色透明固体。
2、微生物试验在 36±1℃培养18~24小时:
方法的局限性:
本培养基鉴定大肠菌群大肠杆菌,少数情况下可能会出现假阳性,但不会出现假阴性,有时可能需做其它补充试验。
典型特征:
大肠杆菌典型菌落为蓝绿色,大肠菌群为无色菌落,其它细菌为无色或黄色菌落。
贮存:制备好的平板应立即使用,应避免光线直接照射。干燥培养基应放置于阴暗干燥处,保存温度2-8C,注意避光保存。
失效:
干燥培养基超过保质期、结块和颜色变化都不能使用。
注意:
此培养基仅供实验室使用。.
参考文献:
1、FRAMPTON, E.W., RESTAINO, L. a. BLASZKO, L.: Evaluation of B- glucuronidase substrate in a 24 hour direct plating method for Escherichia coli. J.Food Protection, 51; 402-404 (1988).
2、KILIAN, M. a. BULOW, P:: Rapid diagnosis of Enterobacteriaceae. I. Detection of bacterial glycosidasesActa Pathol. Microbiol. Scand. Sect. B 84; 245-251(1976).
TBX培养基的微生物灵敏度试验:
按标签用法制备培养基,接种以下质控菌株,放置36±1℃需氧培养18-24小时。
注:回收率计算时,用TSA琼脂做对照培养基。
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