用途:用于支原体的分离培养。
支原体简介
支原体结构简单,缺乏细胞壁,仅有质膜,胞体内有核蛋白体以及一个由环形双链DNA分子组成的原核。大小仅有0.1~0.3μm,最小直径约为100毫微米,可通过滤菌器,会干扰细胞培养等工作的进行。由于能形成丝状与分枝形状,故称为支原体。
不同支原体利用的能源物质不同,如发酵葡萄糖的肺炎支原体、人型支原体等,水解精氨酸的口腔支原体等,还有利用尿素作为能源的解脲支原体。可利用发酵葡萄糖、水解精氨酸、水解尿素等生化反应鉴别支原体。
支原体营养要求一般比细菌高,除必须的基础营养物质外,还需添加10%~20%的动物血清以提供支原体所需的胆固醇。由于大多数的支原体兼性厌氧,有些菌株在活化分离时保持5%~10%二氧化碳环境生长状态更好。解脲支原体在厌氧条件下生长更好。
支原体无细胞壁,对渗透压敏感,对抑制细胞壁合成的抗生素不敏感,因此可添加青霉素抑制细菌的生长。由于渗透压突变会导致支原体破裂死亡,因此培养支原体时,维持适宜的渗透压显得格外重要。此外,在支原体培养中,pH也是重要因素。
肺炎支原体检验依据及培养基原理
支原体检查法在2020年版《中华人民共和国药典》中体现,要求使用支原体肉汤培养基培养监测肺炎支原体。具体操作要求为:将肺炎支原体稀释至10-7~10-9,接种在支原体肉汤培养基中,每个稀释度接种3支试管,置于36℃培养7-14天,观察培养基变色结果。肺炎支原体可以发酵培养基中的葡萄糖,使培养基的pH值降低,遇指示剂酚红使培养基变黄。
猪胃消化粉、牛肉浸粉、酵母浸粉提供碳氮源、维生素和生长因子;葡萄糖为可发酵的糖类;氯化钠维持渗透压;酚红为指示剂。
成分(g/L)
猪胃消化物 |
10.0 |
牛肉浸粉 |
5.0 |
酵母浸粉 |
5.0 |
氯化钠 |
2.5 |
葡萄糖 |
5.0 |
酚红 |
0.02 |
pH值7.6±0.2 |
25℃ |
用法
称取本品 27.52g,加热溶解于 800ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,冷至室温,无菌操作加入 灭活小牛血清或马血清 200ml 和青霉素 80 万单位,混匀,分装无菌试管,备用。
支原体肉汤培养肺炎支原体12天的灵敏度
支原体肉汤培养基微生物灵敏度试验:
按标签用法制备培养基,接种以下质控菌株,放置36±1℃需氧培养7-14天。
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