弧菌显色培养基是青岛海博生物公司改良的培养基,用于食品、海产品、病人粪便样品和水产品中副溶血性弧菌的快速检测。副溶血性弧菌显蓝绿色且菌落比较大,霍乱弧菌和创伤弧菌显紫红色,溶藻弧菌显淡黄色或米黄色;其它细菌绝大部分被抑制。本培养基的特异性高,可以克服TCBS培养基引起的假阴性结果,是一种很理想的快速检测培养基。
成份(g/L)
特殊营养物质 |
75.0 |
混合显色剂 |
4.45 |
琼脂 |
15.0 |
pH 8.6±0.1 25℃ |
此配方可以进行改良或增加营养成份以获得最佳的结果。
用法:
称取本品 18.9g 加入 200ml 蒸馏水,加热溶解并不停搅拌,煮沸3-5次。冷却至 45-50℃ 时,倾入无菌平皿。
注意:制备好的培养基表面不能太干燥。
原理:
利用弧菌自身代谢产生的酶与相应显色底物反应使菌落显色,以区分目标菌与非目标菌。显色底物是由产色因子和微生物部分可代谢物质组成,在特异性酶作用下,游离出产色因子使菌落显示一定颜色。
操作步骤:
1、按国家标准、SN标准、FDA标准或其它方法制备样品液;
2、取 1ml 样品液加入 9ml SCPB肉汤或碱性蛋白胨水中,36±1℃ 增菌培养 18-24 小时;
3、用 3mm 接种环取 1 环增菌液,划线接种到弧菌显色培养基上,做 2 个平板;
4、36±1℃培养 18-24h,副溶血性弧菌显蓝绿色,菌落比较大;霍乱弧菌和创伤弧菌显紫红色,溶藻弧菌显淡黄色或米黄色,其它细菌绝大部被抑制;
5、对可疑菌落可划线接种到营养琼脂平板上,36±1℃ 培养 12-16小时,挑取单菌落做副溶血性弧菌全套生化试验。
质量控制
1、外观
此干燥培养基的粉末均匀,具有良好的流动性,呈淡黄色。制备好的平板呈淡粉色至黄色固体培养基。
2、微生物试验
在36±1℃培养18-24h小时
质控菌株 | 菌株编号 | 生长情况 | 菌落颜色 |
副溶血性弧菌 | ATCC 17802 | +++ | 蓝绿色,菌落比较大 |
金黄色葡萄球菌 | ATCC 25923 | - | - |
大肠杆菌 | ATCC 25922 | - | - |
溶藻弧菌 | ATCC 17749 | +++ | 淡黄色或米黄色 |
非01群霍乱弧菌 | +++ | 紫红色 | |
创伤弧菌 | ATCC 27562 | +++ | 紫红色 |
方法的局限性
本培养基不能直接鉴定霍乱弧菌,副溶血性弧菌的特异性可达 95%,准确性非常高,有时可能需做其它补充试验。
典型特征
典型副溶血性弧菌显蓝绿色且菌落比较大,霍乱弧菌和创伤弧菌显紫红色,溶藻弧菌显淡黄色或米黄色
贮存
制备好的平板可保存2-5天,应避免光线直接照射。干燥培养基应放置于阴暗干燥处,保存温度 2-8℃,注意避光保存。
失效
干燥培养基超过保质期、结块和颜色变化都不能使用。
注意
此培养基仅供实验室使用。
参考文献
1、Kobayashi, T., S. Enomoto, R. Sakazaki, and S. Kuwahara. 1963. A new selective medium for pathogenic vibrios, TCBS(modified Nakanishi's agar). Jpn, J.Bacteriol. 18:387.
2、Nakanishi, Y. 1963. An isolation agar medium for cholerae and enteropathogenic halophilic vibrios. Modern Media. 9:246.
3、Baron, E. J., L. R. Peterson, and S. M. Finegold. 1994. Vibrio and related species, Aeromonas, Plesiomonas, Campylobacter,Helicobacter, and others, p. 429-444. Bailey & Scott's diagnostic microbiology, 9 th ed. Mosby-Year Book, Inc. St. Louis, MO.
副溶血性弧菌的初步检测视频:http://www.hopebiol.com/video/fuhuchubu.asp
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